Teñir gotas de lípidos de adipocitos con rojo oleoso
Este procedimiento involucra a todo el personal técnico, científico y estudiantes que necesiten teñir las gotas de lípidos de adipocitos con rojo oleoso en la Unidad de Investigación Epidemiológica en Endocrinología y Nutrición del Instituto Nacional de Salud Hospital Infantil de México Federico Gómez
Es responsabilidad de todo el personal científico, estudiantes y técnicos adscritos a la Unidad de Investigación Epidemiológica en Endocrinología y Nutrición del Hospital Infantil de México Federico Gómez conocer y dar seguimiento a este procedimiento. Los residuos de tipo CRETI (Corrosivas, Reactivas, Explosivas, Toxicas e Inflamables) se deberán eliminar con base en su clasificación y especificaciones de manejo según la Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-SSA1-2002; así como sus características intrínsecas y su toxicidad al ambiente según la NOM-052- SEMARNAT-2005
Descripción del Protocolo
- Retirar el Medio de crecimiento (MC) a la monocapa de células. Agregar por las paredes del pozo 1 mL de PBS 1X estéril. Realizar movimientos circulares y aspirar el PBS 1X inclinando la placa para evitar aspirar la monocapa de células. Repetir este paso 2 veces más. Agregar suficiente paraformaldehído (PAF) al 4% para recubrir la monocapa de células. De acuerdo con el tamaño de la placa de cultivo a utilizar, añadir: Incubar a temperatura ambiente por 10 minutos. Retirar el PAF con la pipeta y realizar 3 lavados con PBS 1X (descritos anteriormente). En función del tamaño de la placa, agregar el volumen suficiente de Rojo oleoso para recubrir la monocapa de células e incubar a 37ºC por 30 minutos. Retirar el Rojo oleoso y realizar 3 lavados con PBS 1X. Observar al microscopio.
- La adición y eliminación de los reactivos se realizará por las paredes del pozo, para evitar el desprendimiento de la monocapa de células. Para los lavados, los movimientos no deberán ser vigorosos porque puede provocar el desprendimiento de la monocapa de células.
Diagrama de Flujo
Anexos
geles
Placa de cultivo Volumen 6 pozos 700 μL 12 pozos 500 μL 24 pozos 400 μL 48 pozos 300 μL
: Tamaño de ADN y porcentaje de gel {#tbl-gel}
Reactivos y Soluciones
- Reactivos
- UltraPure Agarose de Invitrogen
- SYBR SAFE
- Buffer carga 6X DNA Loading Dye
- Marcador de peso molecular
- TAE 1X
- TAE
| 1X | 50X | |
|---|---|---|
| Tris | 40 mM | 242 g |
| Ácido Acético | 20 mM | 57.1 mL |
| Na2EDTA-2H2O | 1 mM | 18.61 g |
| dH2O1 | 1 L | 1 L |
Documentos de referencia
- Gründemann D., Schömig E. 1996. Protection of DNA During Preparative Agarose Gel Electrophoresis Against Damage Induced by Ultraviolet Light. Research Reports, 21(5):898-903.
- Current Protocols in Molecular Biology, Appendix 2, A.2.5, Supplement 40, Frederick M. Ausubel et al. 2003.
Notas
aforar a↩︎